Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的每一次中逐渐扩展

从第一次出有现胰脏自身致病到出有现1标准型冠心病流行病学患者的十分困难率在儿童中期就有很好的揭示，多个胰脏自身致病阴性的儿童当中有70%在肝细胞转换后10在短期内罹患冠心病，而随访15年的儿童这一比率提高到84%。比起之下，占流行病学1标准型冠心病一半以上的标准型1标准型冠心病的复发机制还从未得到前提的学法术研究。

更为多的人开始应用于分段该系统来定义1标准型冠心病的十分困难：形态在出有现多种胰脏自身致病时进到第1期中，出有现食欲持续性时进到第2期中，出有现患者时进到第3期中。一些多发胰脏自身致病阴性的形态，在1期和2期，十分困难较很慢，并发展为复发的1标准型冠心病。我们之后揭示了一组成员在首次监测到多种胰脏自身致病结果显示后至多于10年无冠心病的快得多十分困难者，这组成员病人人数多于，但构造颇为明确。随后，我们发现胰脏自身免疫特异性CD8+T细胞膜自由基在十分困难极快的病人当中基本不存在，但在近期复发和由来已久的冠心病病人当中很容易监测到。这可能断定，与十分困难病人比起，这些病人自身致病的调节增强。

早期学法术研究断定，尽管调节性T细胞膜(Treg)数量出现异常，但冠心病病人存在一些功用缺点，其当中以外对IL-2的自由基并能降低。此外，冠心病病人当中的现象CD4+T细胞膜可能对调节凸显抵抗性，显出为现象T细胞膜的抑止增强，自然造成的Treg和基底外造成的作用于Treg，以及免疫经历的CD4+T细胞膜当中IL-2自由基增强。本学法术研究的最终目标是揭示了CD4+调节性T细胞膜(Treg)在一小群极极快十分困难者当中的构造，他们的平均平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX学法术研究是一项以人群为了将的侧向学法术研究，在21岁此表确诊的病人家庭成员当中检查1标准型冠心病的危险诱因。我们之后揭示了长期极快十分困难者的构造，他们维持多重胰脏自身致病阴性超过10年，但从未出有现冠心病的流行病学患者，很慢性或非来进行性自身免疫。随后，10名继续维持无冠心病并情愿提供大量血液结果显示的极快十分困难者纳入T和B细胞膜功用研究。在目前的学法术研究当中，8名很慢十分困难者(SP组成员)，当中位平均年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁彼此之间的胰脏自身致病阴性。所有的大多数人都所处1标准型冠心病十分困难的1期，尽管一些人随后一落千丈了胰脏自身致病对某些免疫的阴性自由基，然而，一名病人已经所处2期至多于6年，但从未出有现流行病学患者，一名病人被诊断为冠心病，该病患72岁，在挖掘出实验者结果显示时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据研究当中对该NADPH来进行了基本上检验。受控外周血单个核能细胞膜(PBMCs)，转用多参数流式细胞膜法术和T细胞膜抑止试验车检验NADPH当中Treg的Hz、表标准型和功用。应用于FlowSOM和CITRUS(聚类检验、表征和回归)来进行无监理聚类研究，检验Treg表标准型。

结果：与身体健康NADPH比起，来自很慢十分困难基底的心灵CD4+T细胞膜的监理聚类断定，转录的心灵CD4+ TregHz提高，与抑制作用作用于的TNFR相关蛋白(GITR)理解提高有关。一名HbA1c升高的病人与十分困难极快者和最简单的比对组成员比起，Treg谱有所相异。功用研究断定，与身体健康NADPH比起，来自极快十分困难基底的Treg内源性的CD4+现象T细胞膜抑止明显损毁。显出为对现象CD4+T细胞膜CD25和CD134理解的抑止提高。

示意图1 险恶的表标准型研究断定，CD4+Treg亚标准型在很慢十分困难揭示符当中提高。由FlowSOM作用于的Treg室，聚集在来自所有NADPH的活CD4+CD45RA -细胞膜上。根据标示物理解检验出有10个元簇:心灵T细胞膜_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;心灵T cell_4;CD49b心灵T细胞膜;HLA-DR + GITR +心灵T细胞膜;CPUTreg_1;CPUTreg_2;CPUTreg_3;和CPUTreg_4。(a)应用于9个相异Treg标示作用于的10个元簇的MST。每个结点都有一个协同(100个协同)，更大的元协同(10个元协同)在结点组成员周围上色。每个结点当中的点心示意图指出有单个标示的理解档次。(b)每个元聚类的热示意图，以断定整基底标示理解。(c, d)为HD组成员(c)和SP组成员(d)作用于示意图，以及FlowSOM辨识的每个元簇的覆盖层。(e-l)相较数量级为每个metacluster箱终点站示意图(数量级> 0.05%)确定为HD和SP组成员:CPUTreg_2 (e),CPUTreg_3 (f),CPUTreg_4 (g), HLA-DR + GITR +心灵T细胞膜(h)、心灵T cell_1(i),心灵T cell_2 (j),心灵T cell_3 (k) n d CD49b心灵T细胞膜(l)。深粉红色圆圈都有捐**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于示意图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

示意图2 应用于CITRUS的预测模标准型证实，TregHz的提高是十分困难极快的标志。分级去极化(a - f)和柑橘研究(g-k)来得SP大多数人和最简单的HD大多数人在CD4+CD45RA−T细胞膜上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群基底的都有性示意图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR理解来进行受控，演示FlowSOM群基底。(b) HD(黑点)和SP(黑纹)组成员以及NADPHSP 606(深粉红色)当中CD25+ cd127的Hz综合示意图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+去极化子集的箱终点站示意图;(c) HLA-DRloGITR−(CPUTreg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(CPUTreg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(CPUTreg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+CPUT cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3理解强度着色，圆点明显有的簇被辨识为SP和HD揭示符彼此之间的相异。(j)箱终点站示意图断定了在SP(黑纹)和HD(灰点)组成员当中，CITRUS心灵Treg_3和Treg_4的相较数量级(比率)。(k)直方示意图断定每个簇的表标准型(粉红色)和Treg标示相较理解与着重理解(粉红色);上列，CPUTreg_3;下面一路上，CPUTreg_4。着重与所有其他簇当中标示的理解有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

示意图3 与身体健康献血者比起，十分困难极快者心灵treg的GITR提高。每个心灵CD4+T细胞膜元簇(心灵T细胞膜_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;CD49b +心灵T细胞膜;HLA-DR + GITR +心灵T细胞膜;CPUTreg_2;CPUTreg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)监测每个理解标示的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)揭示符的理解热示意图(sp606不以外在内)。(c,d)心灵Treg_4元簇当中所有HD(红色)、所有SP(粉红色)和SP 606(深粉红色)的FlowSOM GITR理解联接，断定直方示意图(c)和综合示意图(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(深粉红色)所有NADPH以外，p< 0.05(粉红色)NADPHSP 606和最简单的HD不以外在测试当中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs当中GITR理解，从分级去极化，从所有HD(红色)、所有SP(粉红色)和SP 606(深粉红色)联接，断定直方示意图(e)和综合示意图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

示意图4 来自极快十分困难的CD4+ treg细胞膜控制现象CD4+T细胞膜的并能降低。SP组成员用粉红色的终点站和圆圈指出有，HD组成员用黑色的终点站和圆圈指出有，深粉红色的终点站/圆圈指出有NADPHsp606。应用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜来进行分选。CD4+CD25−(此番者)被标示为CFSE, Treg按仔细观察的比率校准。用抗CD3 /28微珠再造细胞膜，指导3天内来进行流式细胞膜法术监测。(a-d)与CD4+此番者相较应的treg指导(自基底)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD此番者指导。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE抑止百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑止百分比。应用于阴性比对(转录的组成员织起来细胞膜不含treg)量化抑止百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重来得测试

示意图5 现象CD4+T细胞膜对极快十分困难的T细胞膜再造的抑止更敏感。SP组成员用粉红色的终点站和圆圈指出有，HD组成员用黑色的终点站和圆圈指出有，深粉红色的终点站/圆圈指出有NADPHsp606。应用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜来进行分选。CD4+CD25−(此番者)被cfsel标示，treg按仔细观察的比率校准。用抗CD3 /28微珠再造细胞膜，指导3天内来进行流式细胞膜法术(CD25反染)和细胞膜因子研究。HD Treg与HD、SP或sp606此番者共同指导。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE抑止花红(b)。(c,d) CD25抑止花红(c)和CD134抑止花红(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共指导当中的理解。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重来得测试

结论：我们得出有的结论是，来自极快十分困难子的再造心灵CD4+Treg在GITR理解当中得到了扩展和颇为丰富，强调了进一步学法术研究Treg在1标准型冠心病风险形态当中的异质性的必要性。

原文原文：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28